Destek kurumu
Süre
Birim
Mesane kanseri, özellikle kasa invaziv olgularda sisplatin temelli kemoterapiye rağmen gelişen kemodirenç nedeniyle önemli bir klinik sorun oluşturmaktadır. Bu projede, sisplatine direnç geliştirmiş mesane kanseri hücrelerinde NAD+ kurtarma yolağının hız kısıtlayıcı enzimi olan NAMPT’nin, spesifik inhibitörü FK866 ile baskılanmasının ferroptoz duyarlılığı üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlanmaktadır. Bu kapsamda ilk olarak T24 insan mesane kanseri hücre hattında sisplatin dirençli bir alt hat oluşturulacaktır. Ardından parental T24, sisplatin dirençli T24R ve normal ürotelyal kontrol hücre hattı SV-HUC-1’de FK866’nın ferroptoz duyarlılığı üzerindeki etkileri karşılaştırmalı olarak değerlendirilecektir. Hücre canlılığı, proliferasyon, koloni oluşumu, NAD+/NADPH düzeyleri, lipid peroksidasyonu, ROS birikimi, hücre içi Fe2+ düzeyi ve Ferrostatin-1 ile geri döndürülebilirlik gibi biyokimyasal ve fonksiyonel parametreler incelenecek; ayrıca transmisyon elektron mikroskopisi ile ferroptoz ile uyumlu ultrastrüktürel değişiklikler morfolojik olarak değerlendirilecektir. Bunun yanında, FK866 uygulamasının indüklediği genom çapındaki ekspresyon değişimlerini belirlemek amacıyla RNA-seq analizi yapılacak ve RNA-seq bulguları doğrultusunda, istatistiksel ve biyolojik açıdan en güçlü adaylar arasından seçilecek mRNA ve lncRNA’lar RT-qPCR ile, ilgili protein karşılıkları ise Western blot analizi ile doğrulanacaktır. Proje sonunda, sisplatin dirençli mesane kanserinde NAMPT inhibisyonunun ferroptoz aracılı hücre ölümü üzerindeki rolünün moleküler, biyokimyasal, morfolojik ve transkriptomik düzeyde ortaya konması ve bu eksenin yeni bir terapötik yaklaşım olarak değerlendirilmesine katkı sağlanması hedeflenmektedir.